Eje problema # 2. Grupo 1.

Eje problema # 2. Grupo 1. Mis respuestas

Eje #2: Buenas prácticas de manufactura y seguridad del paciente en hemoterapia.
Grupo 01
Fecha 21/09/2017

Objetivo General.

Describir los procesos y pruebas realizados en los bancos de sangre, el aseguramiento de la calidad y su relación con la seguridad del paciente.

Objetivos Específicos.

1. Describir el proceso de fraccionamiento de la sangre.
2. Describir las pruebas de control biológico realizadas a la sangre.
3. Describir las pruebas de compatibilidad y tipificación sanguínea.
4. Comprender los protocolos de calidad de los procesos y pruebas en los bancos de sangre.

Preguntas Orientadoras Sesión 1 (29/09/17)

Dimensión Biológica:
1. ¿Cuáles son los componentes que se fraccionan a partir de la sangre y cuál es el proceso para obtener cada uno?

Componente sanguíneo es la fracción celular o acelular del tejido hemático, separado de una unidad de sangre por gravedad o centrifugación o recolectada por hemaféresis; hemoderivado o derivado del plasma es el producto obtenido a partir del plasma por fraccionamiento fisicoquímico dentro de un proceso industrial (*).

El tipo de componente sanguíneo a obtener va a estar en función del tipo de velocidad generada y giro, una velocidad alta permite una “compactación de células rojas” con giro pesado, una velocidad media “mayor rendimiento plaquetario” con giro intermedio y una velocidad baja “poca definición en la separación de las capas” con giro ligero.

Los requisitos para el fraccionamiento de la sangre fresca son: que tenga menos de 6 u 8 horas de haber sido extraída, conservada adecuadamente antes de su fraccionamiento, un peso/volumen de 450 ml ± 10 %, una cantidad de aire no mayor a 5 ml, ausencia de coágulos, datos del donador (nombre y número de identificación), número de la unidad, grupo y Rh, hematócrito y/o concentración de hemoglobina.

El objetivo del fraccionamiento de la sangre es lograr el aprovechamiento óptimo de la sangre, obteniendo: CE, CP y plasma, usando una metodología que asegure que el producto final está cumpliendo con unas normas previamente establecidas y manteniendo las propiedades terapéuticas que se desean (1).

Definiciones de los componentes obtenidos de una unidad de sangre (2):

Sangre total (ST). Contiene 450 mL +/- 45 mL de sangre extraída de un donante, adecuado en anticoagulante (63mL), contenido en bolsas estériles y apirogénicas. Su principal uso es como materia prima para procesar o producir componentes sanguíneos.

Eritrocitos:

-          CE. Producto obtenido al separar el plasma por centrifugación o sedimentación sin ningún otro procesamiento ulterior en cualquier momento antes de la fecha de caducidad.

-          CE lavados. Suspensión de E, obtenida a partir de una unidad de sangre total tras la separación del plasma y en donde la mayor parte del plasma, leucocitos y plaquetas son eliminados por lavados con solución salina.

Plasma:

-          PFC. De donante único u obtenido a partir de unidad de sangre; debe congelarse lo más rápido posible (antes de 6 horas de extraído), para asegurar una tasa de factor VIII igual o > a 70% del factor VIII original.

-          Plasma sobrenadante de crioprecipitado. Componente preparada a partir del plasma mediante eliminación del crioprecipitado. Su contenido de albumina, Ig y factores de la coagulación es el mismo que en el PFC, excepto los niveles de factores lábiles (V y VIII), el fibrinógeno y el vWF que están reducidos.

-          Plasma congelado. Es el separado dentro de los plazos máximos de caducidad de las unidades que cumple con las condiciones del PFC a excepción de la actividad del factor V y VIII:C

-          Plasma sobrenadante de plaquetas (PSP). Plasma obtenido de unidad, la cual ha sido utilizada para obtención de concentrado de plaquetas.

-          Crioprecipitado (Crio). Obtenido a partir del PFC, contiene la fracción crioglobulínica del plasma. Al menos 75% de los crioprecipitados deben contener mínimo de 70 UI de factor VIII, vWF, fibrinógeno, factor XIII y fibronectina presente en el plasma recién extraído.

Plaquetas:

-          CP. Componente derivado de la ST fresca, contiene la mayor parte del contenido plaquetario original.

-          Buffy coat (BC). Capa leucoplaquetaria, que se usa para a producción de interferón natural y extracto dializable de leucocitos con fines terapéuticos.

Los componentes de una donación se pueden utilizar para tratar a varios pacientes con enfermedades diferentes. Esto es posible por la utilización de técnicas de centrifugación, congelación y descongelación, que permiten separar las diferentes células (glóbulos rojos, glóbulos blancos y plaquetas) y el plasma, dando lugar a diversos productos sanguíneos con una composición, una forma de conservación y un uso transfusional propios (3). 

Se produce sedimentación por gravedad si la densidad de la partícula es mayor que la densidad del disolvente. Las velocidades de sedimentación que se dan en condiciones naturales son muy bajas. Para aumentar la velocidad de sedimentación, se utiliza la centrifugación (3).

La centrifugación es una técnica de separación de partículas que se basa en la distinta velocidad de desplazamiento de las partículas en un medio líquido al ser sometidas a un campo centrífugo para la obtención de hemocomponentes. Cuando se centrifuga una solución, se rompe la homogeneidad y se produce la separación del soluto y del disolvente. Las primeras partículas en sedimentar son las de mayor masa (3).

PREPARACION DE CE (3). Este se obtiene por eliminación del plasma sobrenadante de la sangre total centrifugada. El volumen de plasma eliminado determina el hematocrito del componente.

1.      Extracción de sangre se debe realizar en bolsa doble, triple o cuádruple. La unidad se debe refrigerar entre 1 a 6 ºC si no se procesa de inmediato.

2.      Centrifugar utilizando fuerza de centrifugación pesada a 4ºC.

3.      Colocar la bolsa principal que contiene la sangre centrifugada (sedimentada) en un desplasmatizador y suelte el muelle, dejando la placa entre en contacto con la bolsa.

4.      Realice 2 nudos flojos en la tubuladura entre la bolsa primaria y la bifurcación en Y de la tubuladura. 

5.      Obstruir la tubuladura entre los dos nudos con una pinza (ver imagen, este paso lo indica una estrella).

6.      Marca la bolsa satélite con la misma identificación de la principal y romper sello de la bolsa principal que comunica con la satélite. Al traspasar 225 a 250 mL (densidad del plasma 1.023) de plasma a la satélite, en la principal permanecen eritrocitos con un 70-80% de hematocrito.

7.      Pinzar la bolsa satélite al terminar de pasar el plasma.

8.      Almacenar a temperatura adecuada.

PREPARACION DE PFC (3). Este plasma se separa de los elementos celulares y se congela para preservar la actividad de los factores lábiles de la coagulación.

1.      Extracción de sangre se debe realizar en bolsa doble, triple o cuádruple. La unidad se debe refrigerar entre 4 ºC si no se procesa de inmediato; y para obtener PFC debe procesarse antes de las 6 horas de la extraída.

2.      En el procesamiento de CE, punto 6 se obtiene una unidad de PFC junto con el concentrado de eritrocitos.

3.      Congelar el plasma a -18ºC o más, quedando en estado sólido en un plazo de 6 horas desde la extracción. Almacenarlo a esa temperatura.

PREPARACIÓN DE CP A PARTIR DE SANGRE ENTERA (3). El plasma rico en plaquetas es separado de la sangre entera por centrifugación con “centrifugación liviana” y las plaquetas son concentradas por centrifugación pesada con extracción posterior del plasma sobrenadante.

1.      Para preparar un concentrado de Plaquetas se requiere:

1.1. La extracción de sangre se debe realizar en bolsa triple o cuádruplo,

1.2. Que el tiempo de extracción de la unidad a preparar sea menor a 15 minutos

1.3. El recipiente final que almacenara las plaquetas debe ser de un plástico aprobado para el almacenamiento de las plaquetas,

1.4. La unidad extraída se debe mantener a temperatura ambiente (22°C) y procesar antes de 6 horas de extraída.

2.      Centrifugar a velocidad suave (2000g por 3 minutos) a una temperatura de 20°C para obtener plasma rico en plaquetas. Si la temperatura de la centrífuga es de 1 – 6°C, regular el control de temperatura de la centrífuga refrigerada a 20°C y dejar que la temperatura se eleve hasta aproximadamente 20°C.

3.      Procesar de acuerdo con el procedimiento I (puntos desde 3 a 9). Manipule con cuidado para no dispersar las plaquetas que se encuentran suspendidas en el plasma. En el punto 6 traspasa plasma rico en plaquetas a la bolsa satélite I, prevista como la bolsa que almacenara el concentrado de plaquetas.

4.      Centrifugar el plasma rico en plaquetas junto a la(s) otra(s) bolsa(s) satélite a alta velocidad (5000g por 5 minutos) a una temperatura de 20°C. 

5.      Extraer el plasma sobrenadante pobre en plaquetas a bolsa satélite II y dejar bolsa satélite I con 50 a 60 ml de plasma. Sellar la tubuladura en dos puntos, entre ambas bolsas y cortar entre ellos.

6.      Resuspensión de Plaquetas. Las plaquetas centrifugada s se agregan en forma irreversible si son sometidas a una agitación brusca, los siguientes pasos permiten una nueva suspensión sin agregación irreversible.

6.1. El concentrado plaquetario debe permanecer estacionario, con el lado del rotulo hacia abajo, a temperatura ambiente aproximadamente por 1 hora.

6.2. Resuspender las plaquetas en una de las siguientes formas:

6.2.1. Manipular el recipiente de las plaquetas manualmente para lograr una resuspensión uniforme.

6.2.2. Colocar el recipiente en un rotador a temperatura ambiente. La agitación lenta y suave debe lograr una resuspensión uniforme dentro de las 2 horas.

6.3. Mantener las suspensiones de plaquetas a 20 –24°C con agitación suave continua.

6.4. Las plaquetas deben ser inspeccionadas antes de despacharlas para asegurarse que no se visualizan agregados plaquetarios.

6.5. El plasma pobre en plaquetas puede congelarse rápidamente y conservar como plasma fresco congelado

PREPARACIÓN DE CRIOPRECIPITADO DE GLOBULINA ANTI HEMOFÍLICA (FACTOR VIII, FACTOR ANTIHEMOFILICO, FAH) (3). Se puede concentrar el factor VIII de la coagulación del plasma fresco congelado por crioprecipitación. La crioprecipitación se alcanza mediante el descongelamiento lento, a 1 – 6°C, de plasma que ha sido preparado para congelamiento dentro de las 6 horas de la flebotomía.

1.      Para preparar un Crioprecipitado se requiere:

1.1. La extracción de sangre se debe realizar en bolsa triple o cuádruple,

1.2. Que el tiempo de extracción de la unidad a preparar sea menor a 15 minutos

1.3. La unidad extraída se debe refrigerar a 4°C si no se procesa de inmediato.

1.4. Para obtener Plasma Fresco Congelado se debe procesar antes de 6 horas de extraída.

2.      Proceder de acuerdo con el procedimiento para la obtención de PFC. Debe colectar como mínimo 200 ml (205 gramos) de plasma libre de células en la bolsa satélite para el procesamiento del crioprecipitado

3.      Colocar rápidamente plasma en un dispositivo de congelamiento de modo de que este se complete dentro de las 8 horas de la flebotomia y dentro de la hora del momento que se inició el congelamiento. Esto se logra con congelador de aire forzado o congeladores mecánicos capaces de mantener temperaturas de –65°C o menos, hielo seco o un baño de etanol-hielo seco. Las bolsas de plasma sumergidas en liquido deben estar protegidas con una envoltura de plástico.

4.      Dejar descongelar el plasma a temperaturas de 1 a 6°C colocando la bolsa en un refrigerador a 4°C. También puede realizarse este paso colocando la bolsa en un baño de agua batidor a 4°C, en este caso utilizar una envoltura de plástico u otro medio para mantener secas las puertas de la bolsa.

5.      Cuando el plasma tiene una consistencia fangosa, separar el plasma liquido del crioprecipitado por uno de los siguientes procedimientos:

5.1. Centrifugar el plasma a 1-6°C utilizando una centrifugación pesada. Colgar la bolsa en posición invertida y dejar que el plasma separado fluya rápidamente a la bolsa satélite II, dejando que el crioprecipitado se adhiera a los costados de la bolsa primaria. Separa rápidamente, para evitar que el crioprecipitado se disuelva y salga fuera de la bolsa. 

5.2. Colocar el Plasma que se está descongelando en un extractor de plasma cuando aún está congelado aproximadamente el 10% del contenido. Con la bolsa en posición erecta, dejar que el plasma sobrenadante fluya lentamente a la bolsa de transferencia, utilizando los cristales de hielo en la parte superior como filtro. La pasta de crioprecipitado se adhiere a los costados de la bolsa o al hielo. La bolsa satélite II contiene plasma pobre en crioprecipitado.

Una vez extraída la sangre, se puede fraccionar por centrifugación en diferentes Componentes sanguíneos. Cada uno se conserva en soluciones químicas (S. conservadoras) y condiciones físicas (agitación, tº, etc) idóneas para mantener las propiedades hasta el momento de la transfusión y evitar así el crecimiento de bacterias por posible contaminación (4).

Principales componentes sanguíneos (4):

Diferentes componentes sanguíneos y derivados plasmáticos (4):

Concentrado de eritrocitos (CE), sus diferentes tipos son (4):

        I.            CE estándar. Suspensión de eritrocitos, obtenida tras la centrifugación y retirada del plasma de una unidad de 450 mL de sangre total.

     II.            CE en solución aditiva (CESA). Actualmente los CE se conservan en soluciones que se añaden a los eritrocitos ya fraccionados (SAG-M [salino-adenina-glucosa-manitol], Adsol, Nutricel u Optisol) que brindan al medio una adecuada conservación de ATP y 2-3-DGP eritrocitario a lo largo de la conservación.

  III.            CE lavados. Algunos pacientes con RAT no bien definidas, pero causadas por alergia a las proteínas plasmáticas, se benefician de la retirada de estas mediante lavado de los eritrocitos con solución salina fisiológica.

  IV.            CE congelados. Determinadas unidades se conservan a -40ºC u -80ºC por periodos largos (1º años). Por lo que requiere añadir un criopreservante (glicerol al 40-80%) el cual debe retirarse antes de transfundir.

    V.            CE rejuvenecidos. Algunas unidades (excepcionalmente) cuando llegan a su fecha de caducidad, pueden “rejuvenecerse” con la adición de solución PIGP o PIGPA (fosfato, inosina, guanina, piruvato y adenina), restableciendo niveles de 2-3 DPG.

Concentrado de plaquetas (CP) (4):

I.                    CP estándar. Es una suspensión obtenida a partir de una unidad de 450 mL de sangre total. puede obtenerse por centrifugación de la sangre total, a partir de:

- Plasma rico en plaquetas, en forma de CP unitarios. Para adminístralo, se mezclan inmediatamente antes de la transfusión.

- Capa leucoplaquetaria (Buffy coat), se mezclan en sistema estéril antes del almacenamiento.

II.                 CP en solución aditiva. A veces, estos concentrados procedentes de la capa leucoplaquetaria, se conservan añadiendo solución aditiva (PAS). Así, se obtiene un buen rendimiento plaquetario con menos cantidad de plasma residual en cada unidad.

III.              CP de aféresis. Suspensión de plaquetas en plasma, obtenidas por un separador celular a partir de sangre circulante del donante.

IV.              CP congelados. Algunas unidades obtenidas en el numeral III se pueden conservar congeladas a -80ºC para periodos largos. Debiendo añadir una solución criopreservante (ej, DMSO).

Plasma fresco congelado (PFC) (4):

I.                    PFC estándar. Proviene de un solo donante, obtenido de una donación de 450 mL de sangre total. se obtiene por centrifugación de la sangre total. se congela a -30ºC o menos, de tal manera que se garantice 0.7 UI/mL de contenido de factor VIII.

II.                 PFC de aféresis. Con características similares al descrito que se obtiene por aféresis a partir de sangre circulante del donante. En cada proceso, se puede obtener el equivalente de 2 U de PFC estándar, es decir 600 mL

Crioprecipitado (4).

Es un componente sanguíneo obtenido de la congelación del plasma a -80ºC y su descongelación lenta a 4ºC. Así, la mayor parte del plasma vuelve al estado líquido, permaneciendo en estado sólido las proteínas precipitables por el frio: Factor VIII, Factor XIII y algunos Ac IgM.

(*)  http://www.medigraphic.com/pdfs/gaceta/gm-2004/gms043av.pdf 

(1) 

http://www.svh-web.org.ve/index.php?option=com_docman&task=doc_view&gid=887&tmpl=component&format=raw&Itemid=18

(2) http://www.sld.cu/galerias/pdf/sitios/hematologia/componentesangre.pdf.pdf
(3) http://biblioteca.duoc.cl/bdigital/Documentos_Digitales/600/610/39597.pdf
(4) http://www.sehh.es/archivos/informacion_fehh_fondo_capitulo02.pdf


Dimensión Competencias:
2. ¿Cuáles son los protocolos de calidad para el fraccionamiento de la sangre?

El control de calidad de los componentes sanguíneos se refiere a las técnicas y actividades periódicas, las cuales evalúan, desde el inicio todos los pasos involucrados en los procedimientos de obtención de los componentes, tanto la aplicación de estándares en recolección, procesamiento, funcionamiento de equipos, capacitación del personal, almacenamiento de productos, etc. Con ello se debe considerar:

-          Considerar especificaciones mínimas para cada componente sanguíneo y para los procedimientos utilizados:

-          Todos los componentes deben ser inspeccionados visualmente, en cada etapa del procesamiento y antes de ser distribuidos. Se debe retirar si existe evidencia de filtración, daño o defecto en la bolsa, aire excesivo, sospecha de contaminación microbiológica o alteraciones como agregación plaquetaria, turbidez anormal, hemolisis o cambios anormales de color.

El control de calidad debe realizarse frecuentemente (mensual) y después de cualquier mantenimiento de los equipos relacionados a la preparación de los componentes sanguíneos. 

El control de calidad de la ST, CE, CP y PFC; cuando el número de unidades producidas de estos supera las 400 unidades/mes, se debe llevar a cabo en por lo menos 1% del total. cuando es menor a las 400 unidades, el control se realizará a 4 unidades/mes.

El control de calidad para crioprecipitado, se realizará según su uso, sea para aporte de fibrinógeno o aporte de factor VIII.

Cada parámetro verificado por el control de calidad debe presentar un porcentaje de conformidad superior a 75%, excepto el cultivo microbiológico que debe ser 100% de conformidad.

Selección y recolección de muestras.

Para garantizar resultados del contenido del componente, el procedimiento de selección y toma de muestra para el control de calidad deben ser validados, según lo siguiente:

I.                    La selección de las muestras debe ser aleatoria, para que se puedan evaluar todos los aspectos de la preparación y almacenamiento de los componentes.

II.                 La toma de muestra se debe considerar si el componente analizado volverá al inventario o será totalmente usado en el control. Si debe regresar al inventario, la muestra recolectada saldrá del segmento de las bolsas o transfiriendo la cantidad de muestra necesaria a bolsa satélite (por conexión estéril) así se garantiza la integridad del componente a retornar al inventario. 

III.              La temperatura de almacenamiento de las muestras para las pruebas de control, deben seguir las mismas de los componentes, excepto para el PFC y crioprecipitado, los cuales deben estar en refrigerador (2-6ºC) luego de su descongelación. 

IV.              Los recuentos de plaquetas de los CP se realizarán preferiblemente 24 h después de la obtención y adecuada agitación de los mismos, con el fin de asegurar que las plaquetas no estén agregadas en el momento del recuento.

V.                PFC y Crioprecipitado, deben descongelarse en baño María 37ºC e inmediatamente almacenados (2-6ºC) si no se realiza de inmediato el control. Pero los recuentos celulares (residuales, leucocitos, plaquetas y eritrocitos) se deben realizar antes de la congelación de los mismos.

Almacenamiento y caducidad de los Componentes sanguíneos:

https://www.invima.gov.co/images/pdf/normatividad/bancos-sangre/documentos_tecnicos/documento_tecnico_componentes_19-04-2012.PDF

Preguntas Orientadoras Sesión 2 (06/10/17)

Dimensión Biológica:

3. ¿Cuáles son las pruebas de control biológico de la sangre, como se hacen y porque son necesarias?

Realizar tamizaje a las unidades donadas, es una estrategia con la cual, se busca tener y ofrecer sangre segura y disponible. Junto con la adecuada promoción, selección y tamizaje, se puede disminuir la prevalencia de las Infecciones Trasmitidas en Transfusión, reduciendo las pérdidas de sangre y sus componentes (1).

Como se encuentra en el Boletín Informático No. 2 del INS y del Manual de normas técnicas, administrativas y de procedimientos en banco de sangre; los cuales indican como punto de partida, al Decreto 1571, Articulo 42, donde se deben extraer muestras, de la unidad donada, en tubos  y realizarles pruebas de tamizaje obligatorias (2, 3):

I.                   Anticuerpos para HIV 1 – 2

El diagnóstico de la infección por VIH se basa en la detección de anticuerpos séricos (anti-VIH) por las diferentes pruebas tamiz. Sin embargo, existe un periodo aproximado de tres semanas que transcurren entre la contaminación y la aparición de los primeros anticuerpos. Durante la infección temprana, el antígeno p24 es detectado alrededor de 1 a 2 semanas antes de que las pruebas de anticuerpos sean positivas, es por eso que la detección del antígeno p24 del VIH puede reducir el período de seroconversión (cuando este ocurre, el resultado de la prueba de detección de Ac contra VIH cambia de seronegativo a seropositivo). La detección del antígeno p24 y de los anticuerpos anti-VIH-1 y anti-VIH-2, permite reducir el periodo de ventana serológica y reducir el riesgo de transmisión de la infección (5).

Técnicas de Laboratorio 

Las pruebas pueden clasificarse en directas e indirectas, según si se desea detectar la presencia del virus, sus proteínas, ácidos nucleicos, o la respuesta inmunitaria humoral o celular por parte del huésped, para ello los marcadores serológicos son los anticuerpos anti-VIH (1,2, O) y el antígeno p24.

Pruebas de Tamización: 

Se realizan mediante inmunoensayos enzimáticos (ELISA) que emplean como antígeno péptidos sintéticos del virus VIH 1 / 2, VIH 1 del grupo “O” marginal, los que permiten detectar todas las clases de anticuerpos dirigidos contra estos antígenos. Algunos ensayos detectan antígenos y anticuerpos, este tipo de inmunoensayos enzimáticos emplean antígeno recombinante, pépticos sintéticos del VIH 1/2, VIH 1 del grupo “O” marginal y anticuerpos para detección de Ag p24.

Pruebas Confirmatorias o complementarias 

La técnica más empleada es el Western Blot, que permite discriminar contra que antígeno se dirigen los anticuerpos presentes en el suero.

II.                   Anticuerpos para HVC

El virus de la Hepatitis C (VHC) está considerado como el principal agente etiológico responsable del 90 al 95% de los casos de hepatitis post-transfusional no A y no B.

Pruebas de tamización 

Se llevan a cabo mediante la detección de anticuerpos frente a péptidos recombinantes del VHC por métodos de inmunoensayo, los cuales actualmente tienen una sensibilidad superior al 99%. Los anticuerpos anti-VHC aparecen en el suero de los pacientes al cabo de unas 6 semanas tras la infección. Durante este período de ventana serológica, la determinación de estos anticuerpos es negativa, por lo que la negatividad de estas pruebas en una muestra única no descarta la infección por el VHC. Por otra parte, su positividad no distingue entre los pacientes con infección pasada y los que presentan una infección crónica activa.

Los métodos actualmente usados, contienen una mezcla de péptidos sintéticos o recombinantes, o una combinación de ambos, frente a los que se miden los anticuerpos IgG que tiene la muestra.

Pruebas confirmatorias o complementarias 

La confirmación de anticuerpos de los donantes que obtuvieron dos resultados reactivos en la prueba de tamización se lleva a cabo con una prueba tipo Blot. Las cuales se basan en las técnicas de absorción, en las que inmunógenos específicos (es decir: poli proteínas antigénicas) codificados por el genoma del virus son inmovilizados en una membrana como soporte. La visualización de la reactividad de los anticuerpos anti VHC de las muestras con las proteínas individuales codificadas por el virus se logra utilizando un conjugado enzimático de anti IgG humana en conjunto con un substrato enzimático colorimétrico. 

La interpretación de la prueba se basa en el patrón de reacción de bandas presente en la tira, que se puede presentar como: Positivo, Negativo e Indeterminado.

III.               Antígeno de superficie para Hepatitis B (HbAgS)

Detección Cualitativa del Antígeno de Superficie del Virus de la Hepatitis B (HBsAg) (5) 

El HBsAg aparece de varios días a varias semanas después de la exposición al virus, antes de la aparición de la sintomatología y aumento de las transaminasas (periodo de incubación) y puede persistir varios meses. Su persistencia durante más de 6 meses define serológicamente la infección crónica ligada al VHB, su desaparición es habitualmente seguida de la aparición de anticuerpos anti-HBsAg, signo de curación en este caso, la presencia de anticuerpos anti-HBsAg está asociada a la de anticuerpos anti core (anti-HBc).

Detección Inmunoenzimática Cualitativa de los Anticuerpos Totales Contra el Antígeno Core del Virus de la Hepatitis B (anti – HBc) 

El antígeno del core (HBcAg) es un antígeno intracelular que expresan los hepatocitos infectados y que por tanto no se pueden detectar mediante los análisis serológicos. Sin embargo, es posible determinar los anticuerpos contra este antígeno. 

Los anticuerpos totales dirigidos contra el antígeno core del virus de la Hepatitis B (anti-HBc de clase IgM e IgG), pueden ser detectados en el suero de pacientes con infección aguda o crónica, convalecencias, en pacientes curados o portadores asintomáticos mucho después de la infección, por lo que se constituyen en marcadores de una infección en curso o antigua causada por VHB.

Pruebas de Tamización 

Las pruebas de tamización para Hepatitis B son la detección del HBsAg y los anti-HBc de la hepatitis B, mediante inmunoensayos enzimáticos (ELISA).

Pruebas Confirmatorias o complementarias 

-Confirmación HBsAg por neutralización. 

-Determinación de los anti-HBc IgM de VHB 

-Determinación anti- HBsAg

VI.                   Serología de Sífilis

Pruebas de tamización

Pruebas No treponémicas: No detectan anticuerpos específicos contra Treponema pallidum y muestran baja sensibilidad y especificidad, dentro de estas pruebas se encuentran el VDRL (Detecta en sangre la presencia de Ac no específicos "Reaginas", las cuales reaccionan al reactivo VDRL -contiene cardiolipina, lecitina o colesterol-. Esta prueba pone en evidencia la presencia de reaginas dirigidas contra lípidos producidos por la bacteria, pero no detecta la bacteria directamente. La reacción positiva es la Floculación o reacción turbia) y el RPR (similar a la anterior, pero los lípidos -colesterol, cardiolipina- están adsorbido sobre partículas de carbón. La reacción Ac-Ag se presenta por aglutinación macroscópicamente). Un resultado positivo puede ser indicio de una infección activa tratada ó no tratada, o falsos positivos que pueden presentarse en el 1 a 3% de la población general, mujeres embarazadas, pacientes con lepra, malaria, entre otras. Si la sífilis es tratada de forma adecuada el resultado puede volverse negativo, aunque existen casos en que persisten positivos por mucho tiempo e incluso de por vida. 

Pruebas treponémicas: Dentro de estas pruebas se encuentran los inmunoensayos enzimáticos, mediante los cuales se detectan anticuerpos anti T. pallidum IgM, IgG o ambos, con el uso de antígenos recombinantes.

Pruebas confirmatorias

Pruebas treponémicas: Son específicas para la detección del T. pallidum, entre ellas están Hemaglutinación (TPHA), absorción de anticuerpos fluorescentes contra T. pallidum (FTA- ABS), Microhemoaglutinación de anticuerpos anti T. pallidum (MHATP) y aglutinación de partículas de T. pallidum (TPPA).

V.                   Anticuerpos contra el Trypanosoma cruzi (Enfermedad de Chagas).

Pruebas de tamización 

El uso de inmunoensayos enzimáticos permiten detectar anticuerpos anti T. cruzi, reconocidos específicamente por péptidos sintéticos, recombinantes y extracto crudo o lisado de epimastigotes de T. cruzi.

Pruebas complementarias

Prueba de inmunofluorescencia indirecta (IFI): Se basa en el uso de láminas portaobjetos que contienen epimastigotes de T.cruzi previamente fijados y listos para la identificación de inmunoglobulinas específicas (anticuerpos de clase IgG) presentes en el suero del paciente. Éstas se adhieren a la membrana del parásito, siendo detectadas por medio de un conjugado (anti-IgG humana) marcada con isotiocianato de fluoresceína. 

Prueba de hemaglutinación indirecta (HAI): Utiliza glóbulos rojos sensibilizados con antígeno T. cruzi, como resultado estos glóbulos rojos sensibilizados son aglutinados por anticuerpos específicos.

Los donantes infectados pueden no tener signos ni síntomas por estar en el período de incubación – el tiempo que transcurre entre la exposición a los organismos patogénicos y la aparición de los síntomas y signos. El período de incubación puede ser tan corto como unas pocas horas o tan largo, hasta de muchos años, como en el caso del SIDA, la hepatitis, la enfermedad de Chagas y la enfermedad de Creutzfeldt-Jakob (4).

Cuando se sospecha la exposición a ciertos microorganismos debido a que el individuo presenta determinados síntomas, pueden hacerse pruebas específicas para detectar el agente causal, lo cual puede lograrse sólo si aparecen cantidades suficientes de microorganismos o componentes microbianos en el lugar de la infección o en el torrente sanguíneo. No obstante, estos marcadores de infecciones pueden tomar varias semanas e incluso meses antes de alcanzar los niveles que permiten detectarlos por medio de métodos de laboratorio de diagnóstico – ese tiempo es el llamado “período de ventana”. Además, los individuos que desarrollan una enfermedad sintomática pueden sentirse bien después de un período de tiempo – o bien porque tomaron tratamiento antimicrobiano o porque la enfermedad siguió su curso – pero continúan albergando microorganismos infectantes.

Para el Consejo de Europa, los portadores de VIH 1/2, HTLV 1/11, VHB, VHC, Babesia, Leishmania, Trypanosoma cruzi y personas con conductas sexuales con alto riesgo de adquirir enfermedades infecciosas, deberán ser diferidas permanentemente.

     VI.            HTLV 1/2

Técnicas de Laboratorio 

Pruebas de Tamización: 

Imnunoensayos enzimáticos: Detección cualitativa de Ac contra el virus, los cuales utilizan como fase solida pocillos revestidos con Ag recombinantes HTLV 1 y 2. El conjugado utilizado, consiste en una mezcla de Anti-Ac contra Ag virales y una enzima en la mayoría de los casos, peroxidasa. Si hay presencia de Ac Anti- HTLV 1/2 se forma un complejo Ag-Ac, al cual se le pega el conjugado para ser detectado y medido colorimétricamente. 

Pruebas de Confirmatorias:. 
Los  Inmunoblot son inmunoensayos enzimáticos en tira que permiten confirmar la presencia de Ac contra HTLV 1/2, utilizando Ag definidos (derivados proteicos del virus), modificadas e inactivadas. Los Ag son proteínas recombinantes purificadas y fijadas sobre membranas de nylon o nitrocelulosa. 


   VII.            MALARIA

El método mas utilizado es el de GOTA GRUESA de sangre, la cual consta de 2 pasos: Pre coloración que preserva las células sanguíneas e inicia el proceso de deshemoglobilización y coloración que completa la deshemoglobilización y llega a la diferenciación de las estructuras parasitarias.

Son necesarias estas pruebas para garantizar la seguridad del paciente:

-          HEPATITIS. Recordando que el termino indica inflamación del hígado, causa por microorganismos, toxinas biológicas, agentes químicos y procesos metabólicos o autoinmunes. Pero para las pruebas de tamizaje, se dirigen a VHB y VHC, los cuales pueden ocasionar infecciones asintomáticas o hepatitis crónicas, cirrosis, falla hepática y carcinoma de hígado.  

-          VIH. Este virus taca el sistema inmunológico del paciente, por tanto, lo hace vulnerable a infecciones secundarias y oportunistas y al desarrollar cáncer. Presenta el SIDA, estadio avanzado de la enfermedad, con deterioro severo de las defensas del paciente. 

-          SIFILIS. Infección de transmisión sexual (ITS), causada por una bacteria, Treponema pallidum. Entre 9-90 días después de la infección aparece una lesión llamada chancro. Después de 4-5 semanas, el chancro puede desaparecer, aun sin tratamiento, pero la bacteria persiste en el cuerpo. Entre las 4-8 semanas, aparece la sífilis secundaria, caracterizada por fiebre y erupción generalizada. La sífilis terciaria se manifiesta con signos y síntomas neurológicos, cardiovasculares y gomatosos. T. pallidum se inactiva a bajas temperaturas y por lo tanto no se transmite por trasfusión de sangre que ha sido almacenada entre 4-6ºC durante más de 72 h. pero, la transmisión a través de transfusión de plaquetas es posible.

-          ENFERMEDAD DE CHAGAS (Trypanosoma cruzi). Esta enfermedad se desarrolla en dos fases: Aguda, producida en corto tiempo después de la infección y la crónica. Los parásitos están presentes en la sangre de los infectados, en forma regular en la fase aguda y pueden persistir en menos número a través de toda la vida en los infectados que presentan síntomas y en los asintomáticos.

(1) http://www.ins.gov.co/lineas-de-accion/Red-Nacional-Laboratorios/Publicacio/Boletin%20Tecnico%20Tamizacion.pdf

(2) https://www.minsalud.gov.co/Documentos%20y%20Publicaciones/MANUAL%20

DE%20NORMAS%20TECNICAS%20ADMINISTRATIVAS%20Y%20DE%20

PROCEDIMIENTOS%20PARA%20BANCOS%20DE%20SANGRE.pdf

(3) http://www.alcaldiabogota.gov.co/sisjur/normas/Norma1.jsp?i=14527

(4) http://www1.paho.org/hq/dmdocuments/2009/EligiBlood09ESP.pdf

(5) https://www.invima.gov.co/images/pdf/normatividad/bancos-sangre/anexo_tecnico_082.pdf

VDRL: https://tuchequeo.com/que-es-vdrl-significado-de-examen-vdrl-positivo/

RPR: http://www.wiener-lab.com.ar/VademecumDocumentos/Vademecum%20espanol/rpr_slide_test_sp.pdf

Dimensión Competencias:

4. ¿Cuáles son los protocolos de calidad en las pruebas de control biológico?

El control de calidad se refiere a aquellas medidas que deben incluirse durante cada prueba para

verificar que esté funcionando correctamente. En cada corrida deben incluirse los controles que

trae el estuche, montando el número indicado y algunas muestra cuyo resultado ya conocemos en

el laboratorio. Todos los controles deben tratarse del mismo modo que las muestras desconocidas

para validar el funcionamiento de la prueba. Al terminar el procedimiento se leen los controles y

las muestras empleando el mismo criterio de interpretación. Si los controles conocidos producen

resultados aceptables, indica que la prueba es válida y que se cumplieron todas las condiciones

para obtener resultados confiables.

Para que un laboratorio sea considerado respetable y confiable debe producir resultados de

calidad, es decir sin errores. Si se observan las siguientes pautas se puede lograr dicho propósito:

§  Incluya controles de calidad en cada corrida.

§  Siga estrictamente las indicaciones del fabricante en todos los parámetros físicos y técnicos como: número de controles, tiempo de incubación, temperatura, etc.

§  Repita la prueba cuando no tenga un número mínimo de controles dentro de un margen aceptable.

§  Use los estuches dentro de la fecha de vencimiento indicada por el productor.

§  Nunca emplee muestras lipémicas, hemolizadas o contaminadas. Pida una muestra nueva e indique que el resultado no es válido.

§  Asegúrese que todos los tubos están correctamente identificados.

§  Vigile estrictamente el proceso de congelación y descongelación de muestras y mezcle bien antes de usarlas.

§  Revise nuevamente los resultados de las pruebas y de los controles antes de ordenar la transcripción.

Control de calidad para sífilis: Los bancos de sangre y centros de transfusión remitirán al laboratorio de referencia un número de las muestras piloto reactivas para VDRL o RPR. 

Control de calidad para Hepatitis B y C: Los bancos de sangre y centros de transfusión remitirán al laboratorio de referencia un número de las muestras piloto reactivas para antígeno superficial de Hepatitis B para anticuerpos de Hepatitis C. 

Control de Calidad para Chagas: Los bancos de sangre y centros de transfusión remitirán al laboratorio de referencia un número de las muestras pilotos reactivas para chagas. 

Control de calidad para VIH: El sistema de control de calidad para VIH será para todos los laboratorios de salud pública de referencia zonal, para todos los laboratorios locales, regionales y particulares que realicen pruebas presuntivas. Estos enviarán al laboratorio de referencia la totalidad de los sueros que tengan un resultado presuntivo doblemente reactivo, acompañado de la ficha de registro del donante.

https://www.minsalud.gov.co/Documentos%20y%20

Publicaciones/MANUAL%20DE%20NORMAS%20

TECNICAS%20ADMINISTRATIVAS%20Y%20DE%20PROCEDIMIENTOS%20

PARA%20BANCOS%20DE%20SANGRE.pdf

Videos de interés:

-Test rápido para VIH 1-2 (ELISA)

-Western Blot:

- ¿Cómo funciona la prueba de ELISA?